Lot był synem Harana i bratankiem Abrahama. Pochodził z Ur chaldejskiego. Razem z Abrahamem, Saraj i Terachem (swoim dziadkiem) wyruszył z Ur do kraju Kanaan.
Lot musiał rozstać się w pewnym momencie z Abrahamem, ze względu na zbyt liczne trzody, które oboje posiadali. Lot wybrał sobie dolinę Jordanu i wyruszył w tamtym kierunku, w końcu zostając mieszkańcem Sodomy. Z kolei Abraham pozostał w ziemi Kanaan.
Rozdział 19 Księgi Rodzaju opisuje zniszczenie Sodomy i Gomory. Jest to religijne wytłumaczenie zagłady miast leżących w dolinie Jordanu, która nastąpiła, według badań archeologów, na wskutek wstrząsu tektonicznego. Niemniej zgodnie z opisem biblijnym, owa zagłada była karą Bożą za zepsucie obyczajów.
Do Sodomy przybyli dwaj aniołowie, których dostrzegł Lot i zaproponował im, żeby zanocowali u niego w domu. Ci zgodzili się po jego usilnych prośbach. Zanim zdążyli zasnąć, dom Lota został otoczony przez mężczyzn, mieszkańców Sodomy, którzy:
wywołali Lota i rzekli do niego: Gdzie tu są ci ludzie, którzy przyszli do ciebie tego wieczoru? Wyprowadź ich do nas, abyśmy mogli z nimi poswawolić! (Rdz 19,5)
Przerażony Lot zaproponował mężczyznom w zamian towarzystwo swoich córek (propozycja Lota była oczywiście niemoralna w kontekście dzisiejszych czasów), jednak Ci nie chcieli odejść i rzucili się na niego. Wówczas aniołowie wciągnęli Lota z powrotem do domu i zaryglowali wejście, a mężczyzn u drzwi porazili ślepotą.
Aniołowie ostrzegli Lota, że zostali wysłani, aby zniszczyć Sodomę i jeśli chce, żeby ktoś z jego bliskich ocalał, musi wyprowadzić go z miasta. Przyszli zięciowie nie uwierzyli jego słowom.
Kiedy zaś on zwlekał, mężowie ci chwycili go, jego żonę i dwie córki za ręce - Pan bowiem litował się nad nim - i wyciągnęli ich, i wyprowadzili poza miasto. (Rdz 19,16)
Aniołowie rozkazali również Lotowi, aby nie oglądał się za siebie i uciekał, inaczej nadal będzie groziła mu śmierć. Lot ustalił z wysłannikami Bożymi, że schroni się w małym mieście w pobliżu, zwanym Soar.
Kiedy Lot przybył do Soaru, Bóg spuścił na Sodomę i Gomorę deszcz siarki i ognia. Miasta zostały zniszczone doszczętnie, zginęli wszyscy mieszkańcy. Lot ocalał, ze wzgląd na Abrahama, z którym Pan zawarł przymierze, jednak żona Lota, wbrew przykazaniu aniołów, obejrzała się i obróciła w słup soli. W ten sposób Bóg ukarał ją za nieposłuszeństwo.
Znany z Biblii jest także występek córek Lota, które upoiły ojca winem i za jego sprawą zaszły w ciążę. Jedna urodziła syna, któremu nadała imię Moab, z kolei druga nazwała swojego syna Ben-Ammi. Stali się oni praojcami ludu Moabitów i ludu Ammonitów; ludów z którymi Izrael pozostawał w nieprzyjaźni nakazanej Prawem. Albowiem Prawo wprowadzało stanowczy zakaz kazirodztwa (Kpł 18,6-18; Pwt 27,20.23). Potomstwo córek Lota nie należało zatem do narodu wybranego.