Sekwencjonowanie białek

Sekwencjonowanie białek jest metodą oznaczania sekwencji czyli ustalenia kolejności połączenia ze sobą aminokwasów w łańuchu peptydowym. Podstawową zasadą sekwencjonowania jest sekwencyjne odrywanie pojedynczego aminokwasu od łańcucha z tego samego końca łańcucha - N lub C końca. Następnie oddzielony aminokwas jest wydzielany z sekwencji i identyfikowany, a pozostały fragment ponownie poddawany rakcji oddczepiania.

Pośród metod sekwencjonowania łańcucha peptydowego od końca N należy wymienić degradację Edmana, polegającą na zastosowaniu izotiocyjaninanu fenylu (PITC) do utworzenia cyklicznego produktu anilinotiazolinonu (ATZ), który w wodnym kwasowym środowisku przegrupowuje siędo N-fenylotiohydantoiny (PTH). Otrzymaną pochodną identyfikuje się chromatograficznie przez porównanie ze wzorcowymi danymi. Degradacja EDmana jest stosowana do sekwencjonowania łańcuchów peptydowych zawierających do 50 aminokwasów z uwagi na liczne produktu uboczne utrudniające identyfikację i rozdział mieszaniny.

W celu analizy dłuższych sekwencji peptydowych przed przeprowadzeniem degradacji Edmana łańcuchy tnie się na mniejsze fragmenty wykorzystując odpowiednie enzymy: trypsyna hydrolizuje wiązania peptydowe przy grupie karboksylowej lizyny lub argininy, chymotrypsyna rozszczepia łańcuch przy grupie karboksylowej aromatycznych aminokwasów - tryptofanu, tyrozyny i fenyloalaniny.

Jedna z obecnie najwydajniejszych metod oznaczania sekwencji aminokwasów od C końca wykorzystuje enzym karboksypeptydazę do rozerwania C-końcowego wiązania amidowego w łańcuchu peptydowym. Roztwór aminokwasu indukuje się wraz z enzymem i monitoruje w czasie jakie wolne aminokwasy są rejestrowane jako pierwsze. 

Polecamy również:

  • Struktura przestrzenna białek

    Dyskutując strukturę przestrzenną białek wyróżnia się 4 poziomy organizacji strutury białkowej. Najbardziej podstawowym poziomem jest struktura pierwszorzędowa, która opisuje kolejność połączeń kolejnych reszt aminokwasowych w łańcuchu i w przypadku organizmów żywuch jest ona uwarunkowana kodem... Więcej »

  • Rodzaje i funkcje białek

    Pośród ważnych biologicznie rodzaji białek można wymienić: enzymy - wysoce specyficzne, katalizują od jednej do kilku reakcji chemicznych zachodzących w organizmach żywych. Istotnąrolę ogdrywają głownie w procesach metabolicznych, oraz przu manipulacji DNA. Znane są przykłady enzymów dokonujących... Więcej »

Komentarze (0)
Wynik działania 2 + 2 =
Ostatnio komentowane
"Mianem libertarianizmu zwykło się nazywać najbardziej radykalny nurt liberalizmu." No...
• 2024-03-01 10:11:23
kys(keepurselfsafe)
• 2024-02-28 14:36:21
Super i MEGA pomocne!
• 2024-02-28 10:18:34
joł joł jowisz najwiekszy olbrzym gazowy 5 od słonca na pewno nie przeoczysz choć mooj...
• 2024-02-27 14:59:44
Ok
• 2024-02-27 09:29:45